一、原代細(xì)胞分離培養(yǎng)介紹

原代細(xì)胞(primary cell)是指從生物體獲取細(xì)胞直接培養(yǎng)。常用的原代細(xì)胞分離培養(yǎng)方法有組織塊培養(yǎng)和分散組織培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)：是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)法是常用的、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。將組織塊剪切成小塊后，接種于培養(yǎng)瓶，組織小塊貼壁24h或更長(zhǎng)時(shí)間后，細(xì)胞就從組織四周游出。但由于在反復(fù)剪切和接種過(guò)程中對(duì)組織塊的損傷，并不是每個(gè)小塊都能長(zhǎng)出細(xì)胞。用于組織塊培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶可根據(jù)不同細(xì)胞生長(zhǎng)的需要作適當(dāng)處理，如：預(yù)先涂以鼠尾膠原薄層，以利于上皮樣細(xì)胞等的生長(zhǎng)。

分散組織培養(yǎng)：是將組織塊從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞，置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖。分散組織培養(yǎng)也是常用的一種原代細(xì)胞培養(yǎng)方法，通常用機(jī)械法或化學(xué)法將組織塊分散為單細(xì)胞。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性較好的游離細(xì)胞，經(jīng)典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細(xì)胞間的結(jié)合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細(xì)胞互相粘著所依賴(lài)的Ca2+，再經(jīng)機(jī)械輕度振蕩，使之成為單細(xì)胞。

二、注意事項(xiàng)

1. 取材的組織要盡快培養(yǎng)。如若不能及時(shí)培養(yǎng)，可將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應(yīng)切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時(shí)間不能超過(guò)24h。

2. 從消化道、周?chē)袎乃澜M織等污染因素存在的區(qū)域取材，可用含500～1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達(dá)克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養(yǎng)。

3. 組織塊不易貼壁，可預(yù)先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

4. 原代培養(yǎng)的1～2d內(nèi)要特別注意觀察是否有細(xì)菌、真菌、霉菌的污染，一旦發(fā)現(xiàn)，要及時(shí)清除。

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